一、儀器安裝應(yīng)注意事項(xiàng)

1、安裝本儀器的實(shí)驗(yàn)臺(tái)應(yīng)水平、穩(wěn)固，并具有足夠的放置空間；

2、避免在具有腐蝕性氣體、大量灰塵或能產(chǎn)生強(qiáng)磁場(chǎng)的地方安裝儀器，否則將會(huì)影響儀器的正常運(yùn)轉(zhuǎn)并且縮短儀器的使用壽命；

3、由于儀器所用的溶劑是易燃并且有毒的，故安裝儀器的房間應(yīng)保證通風(fēng)，且具有向外排風(fēng)的裝置，否測(cè)會(huì)引起中毒或身體不適，也會(huì)引起火災(zāi)；

4、安裝四個(gè)以上的三芯電源插座（220V，10A）,必須具有專門(mén)的接地線（注意絕不能將電源線的中性線作為接地線），并確保儀器電源的電壓穩(wěn)定在交流（220V ±20V）,否測(cè)會(huì)導(dǎo)致儀器的不正常運(yùn)作至損壞儀器；

5、實(shí)驗(yàn)室的室溫盡可能控制在15～30℃范圍內(nèi)，并且波動(dòng)要小；濕度在45%～80%范圍內(nèi)；由空調(diào)或其它設(shè)備產(chǎn)生的氣流不要直吹儀器上，造成儀器的基線不穩(wěn)；避免光線直射及振動(dòng)；

6、儀器啟動(dòng)順序：先開(kāi)高壓恒流泵和紫外檢測(cè)器，待紫外檢測(cè)器自檢完畢，回到默認(rèn)波長(zhǎng)254nm后，打開(kāi)工作站軟件；

7、儀器關(guān)閉順序：關(guān)閉氘燈，沖洗儀器及色譜柱，停泵，退出工作站軟件，關(guān)閉儀器的電源開(kāi)關(guān)。

8、儀器應(yīng)由專人負(fù)責(zé)，如果使用人員不固定，請(qǐng)準(zhǔn)備《儀器使用登記本》，以明確使用情況，及時(shí)處理和保養(yǎng)。

二、使用流動(dòng)相的注意事項(xiàng)

1、過(guò)濾

必須使用HPLC 級(jí)或相當(dāng)于該級(jí)別的流動(dòng)相，并要先經(jīng)0.45μm或0.22μm 薄膜過(guò)濾。

2、脫氣

1）氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。

2）加熱回流法：效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染。

3）抽真空脫氣法：易抽走有機(jī)相。

4）超聲脫氣法：流動(dòng)相放在超聲波容器中，用超聲波震蕩15~20分鐘，此法效果較差，但操作簡(jiǎn)單。

3、如果管路中使用peek樹(shù)脂部件，請(qǐng)不要使用下列流動(dòng)相：濃硫酸、濃硝酸、二氯乙酸、丙酮、四氫呋喃、二氯甲烷、氯仿和二甲基亞砜。

4、含有緩沖鹽溶液的流動(dòng)相的清洗方法：

1）先用10：90 的甲醇/水（或者乙腈/水），泵的流速：1ml/min把保存在甲醇（或者乙腈）中的色譜柱沖洗40分鐘以上，使色譜柱充滿10：90 的甲醇/水（或者乙腈/水）。

2）更換含有緩沖鹽溶液的流動(dòng)相。穩(wěn)定后，做樣品。

3）做完樣品后，用10:90的甲醇/水（或者乙腈/水），泵的流速：1ml/min沖洗色譜柱1小時(shí)。

4）再用甲醇（或者乙腈），泵的流速：1ml/min 沖洗系統(tǒng)，并將色譜柱和系統(tǒng)保存在甲醇（或者乙腈）中，清洗時(shí)間至少為1小時(shí)。

三、流動(dòng)相的過(guò)渡(流動(dòng)相的反相系統(tǒng)改變?yōu)檎�相系統(tǒng))

在更換流動(dòng)相進(jìn)行分析時(shí)，一定要注意前一種使用的流動(dòng)相和所更換的流動(dòng)相是不是能夠相溶。如果前一種使用的流動(dòng)相和所更換的流動(dòng)相不能夠相溶，那就要要采用一種與這二者都能夠相溶的流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)渡。較為常用的過(guò)渡流動(dòng)相為異丙醇，但實(shí)際操作中要看具體情況而定，原則就是采用與這二種需更換的流動(dòng)相都能夠相溶的流動(dòng)相。一般清洗的時(shí)間為30-40 分鐘，直至系統(tǒng)完全穩(wěn)定。

四、帶柱后清洗裝置的恒流泵所用的清洗液

1、反相系統(tǒng)所用的清洗液是10%異丙醇的水溶液（經(jīng)過(guò)濾后的）；

2、正相系統(tǒng)所用的清洗液是純異丙醇試劑（經(jīng)過(guò)濾后的）。

（注意：帶柱后清洗裝置的恒流泵，其清洗裝置不能沒(méi)有清洗液。如果沒(méi)有清洗液將會(huì)造成其清洗裝置的密封圈的損毀。）

五、管路連接的注意事項(xiàng) ：

1、將管子完全插入開(kāi)口端，直至其與開(kāi)口端的末端相碰為止。否則將產(chǎn)生死體積，引起峰展寬。

2、為了使柱外效應(yīng)減到最小，獲得理想的分析結(jié)果，盡量使用管徑細(xì)的管路作為連接。

3、管路接頭不要擰的過(guò)緊，以防損壞螺紋。

六、使用進(jìn)樣閥的注意事項(xiàng) :

1、液相進(jìn)樣針均為平頭，切忌不能使用尖頭進(jìn)樣針，否則將會(huì)損毀進(jìn)樣閥。

2、LOAD為進(jìn)樣鎖定位置，INJECT為進(jìn)樣分析位置，互切換時(shí)盡量速度快 ，不得在當(dāng)中停留，否則會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)壓力加大。

3、進(jìn)樣量需至定量環(huán)的3-5倍以上才能精確定量。

4、兩種不同樣品進(jìn)樣之間應(yīng)該分別用甲醇清洗LOAD和INJECT位置，以防樣品交叉污染。

高效液相色譜儀（HPLC）的幾個(gè)使用問(wèn)題

1、色譜柱中的流動(dòng)相會(huì)排干嗎？

不少做色譜分離試驗(yàn)的人遇到過(guò)這樣的情形：不慎未及時(shí)補(bǔ)充流動(dòng)相，泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會(huì)損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動(dòng)相都排干了？色譜柱還能使用嗎？

事實(shí)上，如果泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干，并不會(huì)造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，泵也不會(huì)將空氣排入色譜柱。因?yàn)楸弥荒茌斔鸵后w，而不能輸送空氣。相比之下，另一個(gè)更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個(gè)色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個(gè)毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑使色譜柱變干需要相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間。即使色譜柱真的變干了，也不一定就不可救藥了。可以嘗試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑（如經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤(rùn)填料表面；已脫氣的溶劑應(yīng)該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要以1mL/min的流速）一個(gè)小時(shí)或更多的時(shí)間被徹底浸潤(rùn)，恢復(fù)到正常狀態(tài)。

2、使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接頭需要注意什么問(wèn)題？

如果經(jīng)常需要改變流路或更換不同品牌的色譜柱，使用PEEK材料制成的管路和接頭會(huì)非常方便。PEEK管路容易連接；PEEK接頭不僅無(wú)需工具，手?jǐn)Q即可固定，而且容易調(diào)節(jié)錐箍之外的管路長(zhǎng)度，方便與不同品牌或規(guī)格的色譜柱相連接。

使用此類材料的管路需要注意的是：PEEK對(duì)鹵代烷烴和四氫呋喃的兼容性不好。雖然未觀察到上述溶劑溶解PEEK材料的明顯跡象，但PEEK遇到上述溶劑會(huì)變脆。另一個(gè)需要考慮的因素是壓力限。不銹鋼管可耐受6000psi的壓力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多數(shù)HPLC應(yīng)用系統(tǒng)壓力不會(huì)超過(guò)3000psi）。

使用PEEK接頭時(shí)則無(wú)需擔(dān)心接頭耐溶劑性能，因?yàn)榻宇^幾乎或很少與溶劑直接接觸。但手?jǐn)Q固定的PEEK接頭壓力限低于不銹鋼管，因而壓力太高時(shí)，可能會(huì)使接頭在管路上滑動(dòng)而產(chǎn)生死體積或漏液。

3、如何預(yù)防液相泵的故障？

要保持泵的良好操作性能，必須維護(hù)系統(tǒng)的清潔，保證溶劑和試劑的質(zhì)量，對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾和脫氣。下面列出預(yù)防泵故障的幾項(xiàng)措施:

1）用高質(zhì)量試劑和HPLC級(jí)溶劑

2）過(guò)濾流動(dòng)相和溶劑

3）脫氣

4）每天開(kāi)始使用時(shí)放空排氣，工作結(jié)束后從泵中洗去緩沖液

5）不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中

6）定期更換墊圈

7）需要時(shí)加潤(rùn)滑油

8）查閱有關(guān)泵操作手冊(cè)中的其它建議

HPLC系統(tǒng)應(yīng)用秘訣

秘訣1：由強(qiáng)到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進(jìn)行試驗(yàn)， 這樣可以很快地得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)的比例。

秘訣2 ：三倍規(guī)則：每減少10%的有機(jī)溶劑(甲醇或乙腈)的量，保留因子約增加3倍，此為三倍規(guī)則。這是一個(gè)聰明而又省力的辦法。調(diào)整的過(guò)程中，注意觀察各個(gè)峰的分離情況。

秘訣3：粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào)：當(dāng)分離達(dá)到一定程度，應(yīng)將有機(jī)溶劑10%的改變量調(diào)整為5%，并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率，直至各組分的分離情況不再改變。